9月21日星期一
DTU卫生技术研究人员开发了一种检测SARS-CoV-2 RNA的方法，这种方法可以设计用于检测其他疾病。
目前世界卫生组织推荐的SARS-CoV-2 RNA检测方法严重依赖生物酶的作用。高成本、严格的运输和储存条件以及全球酶供应短缺限制了大规模检测。这意味着大多数国家必须优先对易感染病例进行检测，这会造成诊断和确定阳性病例的延误，这也会妨碍大流行的缓解和抑制。
定量逆转录聚合酶链反应（qRT PCR）仍然是全基因组检测的金标准，在控制新冠病毒-19大流行方面发挥着关键作用。然而，结果样品需要几个小时，并且该方法需要一个复杂的热循环仪器，以在离散步骤中升高和降低反应温度。
更简单、更便宜
非酶等温扩增法由于其简单、快速的特点，已显示出替代qRT-PCR的潜力。尽管这些方法在目标基因较短时表现良好，但它们仍不能有效地检测整个基因组（长DNA或RNA目标）。
博士后Mohsen Mohammadniaei
“直接参与改善人们的健康是生物医学研究人员的终极梦想，我们相信NISDA分析为我们提供了实现这一目标的绝佳机会。”
在新冠病毒-19大流行期间，仅欧元区的GDP在2020年第一季度就下降了3.8%（欧盟统计局2020）。因此，开发一种低成本的病原体检测方法对患者和旨在对抗未来流行病的医疗系统都非常有益。
DTU Health Tech的副教授孙毅和博士后研究员Mohsen Mohammadniaei发明了一种一锅法，他们将其命名为NISDA（非酶等温链置换和扩增分析）。该检测方法用于快速检测SARS-CoV-2 RNA，无需qRT PCR方法中的RNA逆转录步骤。作为一个罐，可实现单步检测程序，即用户只需将样品添加到一根试管中，将其放置在仪器中并等待30分钟即可获得结果。
该分析在恒温下工作，不需要酶，并且基于脚趾支撑介导的链置换（TMSD）方法。TMSD是一种无酶分子工具，其中一条DNA或RNA链（输出）被另一条DNA或RNA链（输入）取代，形成更稳定的双链结构。
高精度和高灵敏度
NISDA分析能够检测到非常低浓度的RNA（10份/微升）仅需30分钟。通过与Hvidovre医院和Bispebjerg医院的合作，研究团队可以对NISDA分析进行临床验证，在实验室和医院进行设置时，分别代表100%的特异性以及96.77%和100%的敏感性。
孙毅副教授说，“我们利用TMSD方法并设计了三种DNA探针。一种探针将整个基因组交换成短DNA链，另两种探针利用交换的短DNA触发荧光信号放大级联反应。NISDA分析的优点在于其简单。我们取消了使用酶来降低分析成本并增强其在室温下的鲁棒性。”
在分析工作流程中，将从咽拭子样本中提取的RNA添加到反应混合物中，并在42°C下培养30分钟。下一步是荧光测量，荧光信号明显高于对照样品（阴性）的样品视为阳性。
走向多疾病诊断工具
博士后研究员Mohsen Mohammadniaei说：“直接参与改善人们的健康是生物医学研究人员的终极梦想，我们相信NISDA分析为我们提供了实现这一目标的绝佳机会。”。
“下一步是进一步设计用于检测不同病原体的NISDA分析，并开发用于多种疾病诊断的护理点诊断设备。NISDA分析的另一个优势是其能够针对短RNA靶点（如癌症生物标记物microRNA）进行设计。我们目前正在探索不同的商业化方案。”“NISDA分析的非标准化，我们确信NISDA分析将在不久的将来广为人知”，孙毅副教授完成。
请阅读《自然交流》的全文：https://www.nature.com/articles/s41467-021-25387-9
图：NISDA分析包括一根含有三个DNA探针的单管。在加入从拭子样本中提取的RNA并在42℃下培养30分钟后，阳性样本显示出比阴性样本更高的荧光信号。
